NHS 活化琼脂糖说明书

1. 简介

    NHS 活化的琼脂糖树脂将蛋白质简单有效地共价固定到珠粒-糖链载体上，为抗体、抗原或其他生物
分子的亲和纯化提供了有价值的方法。活化的（sefinose）琼脂糖含有能够与蛋白质或其他分子上的伯胺
反应形成稳定的酰胺键的 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）官能团。耦合反应在 pH 7~9 的无胺缓冲液中进
行。不管配体的分子量或等电点（PI）耦合反应的效率均大于 80%。一旦配体被固定，所制备的树脂即
可以被应用到多重亲和纯化程序中。交联的串珠塞糖具有快速的线性流动电位，使其可用于重力流和中低
压应用中。                                                                                                                                                                                   

2. 介质性质

●   琼脂糖浓度
4%
●   粒径范围
45-165μm
●   功能基团
Ni²⁺
●   结合载量
大于10 mg IgG/ml 基质
●   存放条件
4-10℃
●   运输与储存溶液
异丙醇                                                                                                                                                                                                  
3 蛋白配体固定过程
Buffer 的准备
所有的水和缓冲液均用 0.22 μm 或 0.45 μm 的滤膜进行过滤。
所需附加材料
1. 空柱以及兼容的离心机/收集管。
2. 洗涤液：1 mM 盐酸。
3. 偶联液：0.2 M NaHCO3，0.5 M NaCl，pH 8.0 或其他无胺缓冲液。
 

	Note: 偶联液可以选择碳酸盐、磷酸盐等不含氨基的缓冲液体系。缓冲液体系中加入一定浓度 的盐离子减少非特异性吸附

 
 
 

4. 洗涤液 1：0.1 M 乙酸-乙酸钠，0.5 M NaCl，pH 3.0。
5. 洗涤液 2：0.1 M Tris-HCl，0.5 M NaCl，pH 8.0。
6. 保护液：包含 20%乙醇的 1* PBS。
7. 含氨基的蛋白或者多肽：在 2~3 ml 偶联液中溶解 1~20 mg 蛋白或 1~2 mg 多肽。对于已经在溶液
中的蛋白质，在耦联液中稀释 4 倍，或将脱盐/透析稀释到偶联液中。彻底清除含有伯胺的缓冲液
（如 Tris 或甘氨酸）。
8. 封闭液：0.5 M 乙醇胺，0.5 M NaCl，pH 8.3 或 0.1 M Tris-HCl，pH 8.5。

抗原偶联过程
颠倒混匀琼脂糖凝胶几次。
1、垂直放置含有 NHS 活化树脂的柱子，平衡柱至室温，使树脂沉降。用洗涤液通过抽滤洗涤三次，再
用耦合缓冲液洗涤一次。
 

	Note: 在实验过程中不能使树脂床变干，通过吹打或震荡使结块溶解，可以通过遇冷溶液快速清洗预防 水解作用。

 
 
 

2、添加溶解好的蛋白样品到清洗完毕的 NHS 活化的琼脂糖中（NHS 活化琼脂糖 4 FF 体积：样品溶液体积=1：1~2）。
3、混合震荡反应在 28℃进行 2~4 h，或者 4℃过夜。
 

	Note: NHS-Activated SefinoseTM 4 FF 必须是悬浮状态,否则会影响偶联效率。

 
 

4、收集耦合样品，以便检测耦合效率。填料用去离子水进行洗涤。加入两倍柱体积的封闭液于28℃震
荡反应 1 h。
5、流干封闭液并去除，加入三倍柱体积的去离子水洗涤树脂。树脂洗涤分别通过洗涤液 1、去离子水、
洗涤液 2、去离子水按顺序重复洗涤两次， 然后加入相同体积的保护缓冲液，于 2~8℃储存。
 

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