1 产品介绍
基因型为：C58 (rifR) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (kanR) Nopaline。
适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作。
经pK7WGF2质粒（壮观霉素抗性）检测转化效率高达10³cfu/μg。
2 操作步骤：
2.1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入 冰中。
2.2.每100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
2.3. 加入700 μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
2.4. 6000 rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
（当平板只含有转化质粒上的抗生素时，28℃培养48 h即可；平板中同时含有转化质粒上的抗生素和20μg/ml rif 时，需28℃培养60 h；如果使用的平板含有50μg/ml rif 则需要28℃培养72-90 h）。
3 注意事项：
3.1. 感受态细胞最好在冰上融化。
3.2. 混入质粒时应轻柔操作。
3.3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3.4. 利福平浓度不应高于25 μg/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml壮观霉素，若所用平板含有20 μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
3.5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失，但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。

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