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Enterokinase,Recombinant,Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签)
Enterokinase,Recombinant,Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签)
中文名称: Enterokinase,Recombinant,Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签) 
英文名称: Enterokinase,Recombinant,Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签) 
分子式:   分子量:  
CAS号: EINECS编号:  
储存条件: 见产品介绍 
中文别名:  
是否危险: 否 
产品简介
重组肠激酶(rEK)是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段,氨基酸序列与牛肠激酶轻链一致,有着和天然提取的肠激酶同样特异的酶切位点,切割位点Asp-Asp-Asp-Asp-Lys,可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合标签,同时重组肠激酶(rEK)具有比天然酶更高的切割活性。
重组肠激酶为采用重组大肠杆菌分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶,不含其他蛋白酶,可以在较宽pH范围(4.5-9.5)和较宽温度范围内有效切割融合蛋白,并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本品不含标签,由于具有极高酶切活性,酶切反应使用量少,不影响下游蛋白应用,可不考虑除去。
产品信息
规格
100 U / 200 U / 500 U / 1000 U / 5000 U
产品性质
来源(Source)
大肠杆菌表达
分子量(Molecular Weight)
理论值25.85 kDa
外观(Appearance)
澄清、无色至淡黄色液体
酶浓度(Enzyme Concentration)
≥5 U/uL
活性定义(Activity Definition)
一个活性单位定义为25°C,12-16 h,在25 mM Tris-HCl,Ph 8.0缓冲体系下,将500 μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白切开95%所需要的酶量
内毒素检测(Endotoxin)
用LAL法测定内毒素含量小于1 EU/μg
质量保证(Quality assurance)
经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;不含其他蛋白酶,无非特异性切割
缓冲体系(Buffer)
50 mM Tris-HCl,pH8.0,250 mM NaCl,2 mM Ca 2+,50%甘油
储存条件
-25~-15℃保存,有效期2年。尽量避免反复冻融(5次以内,无活性损失)
使用方法(应用举例)
【注】该酶效力高且待切蛋白结构性质不同,建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。 1)反应体系
融合蛋白 0.05-0.1 mg(蛋白浓度:0.1-1 mg/mL)
Enterokinase 0.1-0.2 U
缓冲体系 25 mM Tris-HCL 8.0
2)反应条件:25°C过夜酶切(注:完全酶切需要16-24 h)。
【注】重组肠激酶可使用25 mM Tris-HCl pH 8.0稀释成每1 μL含0.1 U的溶液使用。
4°C低温酶切条件:4°C能对底物进行有效酶切,但需要延长酶切时间至48-64 h 或者增加2-3倍酶量。
注意事项
1.本产品所讲述的缓冲体系需要自行配置。
2.不建议37℃条件下酶切,可能会有非特异性酶切出现。
3.在>200 mM咪唑,或>200 mM NaCl,或>5%甘油,酶切会受到影响。如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种,为获得理想的酶切结果,请先将样品透析到25 mM Tris-HCl 8.0缓冲液中,然后再进行酶切实验;若不方便透析,可将样品稀释到咪唑含量在100 mM以下,NaCl浓度在50 mM以下,甘油浓度小于5%以下进行酶切,酶的用量与蛋白比例不变;若干扰因素很多,且不便去除,需要适当增加酶量或延长酶切时间,有助于得到理想的酶切效果。
4.磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用,痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性,因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
5.本品是具有高酶活力重组肠激酶,切割蛋白使用量少,可不考虑除去。后续如需去除重组肠激酶,可用阴离子交换树脂(如DEAE-FF)对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下: 平衡缓冲液:25 mM Tris-HCl pH 8.0
洗脱缓冲液:25 mM Tris-HCl pH 8.0,含100 mM NaCl
6. 蛋白酶切效果不好,可适当增加酶量,或适当延长酶切时间。
7. 本产品仅作科研用途。
8. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
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