高纯质粒小提试剂盒（目录号：RTP2101）
试剂盒内容及保存： 试剂盒组成 RTP2101-02 （100次） RTP2101-03 （200次） 贮存 RNase A 300 μl 600 μl -20℃ Lysis Dye 600μl 2×600μl 室温 溶液P1 30 ml 60 ml 室温 （加入RNase A后2-8℃保存） 溶液P2 30 ml 60 ml 室温 溶液P3 40 ml 80 ml 室温 去蛋白液PD 60 ml 120 ml 室温 漂洗液PW 25 ml 2×25 ml 室温 洗脱缓冲液EB 15 ml 15 ml 室温 质粒吸附柱CP 100个 2×100个 室温 收集管（2 ml） 100个 2×100个 室温 说明书 1份 1份    
储存条件和效期： 本试剂盒在室温（25℃左右）干燥条件下，可保存1年；更长时间的保存可置于2–8℃。2–8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。单独包装的RNase A 在-20℃可稳定保存1年以上。加入RNase A后的溶液P1应置于2–8℃保存，可稳定保存半年。  

产品简介：及使用说明： 本试剂盒采用经典的碱裂解法裂解细菌，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合DNA的特性，可以从1–5ml大肠杆菌LB培养液中快速提取3–20μg纯净的高拷贝质粒DNA。提取的质粒可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等实验。然而，对质粒纯度要求更高的转染实验（要求无内毒素），此试剂盒不能达到要求。另外，尽管该试剂盒可以抽提较大的质粒（>10kb），但我们不推荐使用。如果一定要使用，请参考以下方法：加大菌体使用量（使用5–10 ml过夜培养物），同时按照比例增加P1、P2、P3的用量；洗脱缓冲液应在70℃预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率，其它步骤相同。  
产品特点： 1使用了Lysis Dye，菌体裂解是否完全一目了然。由于判断菌体裂解和中和是否彻底更主要取决于操作者的经验，所以我们增加了Lysis Dye（一种能使裂解/中和体系变换颜色的试剂）来帮助观察裂解/中和的程度。加入P1后，Lysis Dye使菌液变为浑浊的红色；加入P2后，Lysis Dye立即使溶液变为澄清的红色，裂解是否完全只要观察红色溶液是否澄清，如果红色非常均一，表明裂解充分；在完全裂解的体系中加入P3混匀后，体系立即变为黄色，任何红色的残留表明没有完全混匀或者中和不彻底。 2 增加了去蛋白液PD，能更加彻底地去除蛋白污染，得到纯度更高的质粒。
准备工作： 1 将试剂盒附带的RNase A全部加入到溶液P1中（如15ml P1中加入150μl RNase A），混匀后4℃贮存。 2 按照标签所示在漂洗液PW中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。 3 每次使用前请检查溶液P2，溶液P3和去蛋白液PD是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。  
使用Lysis Dye的标准操作步骤： 如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 1．   取1–5 ml过夜培养的菌液加入离心管中，10,000g 离心1分钟，尽量吸除上清。 注：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。 2．   向菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1（请先检查是否已加入RNaseA）和5μl Lysis Dye，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀，此时溶液为浑浊的红色。 注：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。 3．   加入250 μl溶液P2，温和地上下翻转6–8次使菌体充分裂解，此时溶液变为澄清的红色。 注：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA；所用时间绝对不应超过5分钟 ，以免质粒受到破坏；红色溶液应该透明均一，如有浑浊红色颗粒，表明裂解不充分，会大大降低质粒提取效率。 4．   加入350 μl溶液P3，立即温和地上下翻转，充分混匀，混匀充分的标志是溶液完全呈透明的黄色，如有可见红色，说明混匀不彻底。10,000g 离心10分钟。 注：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。 左侧未完全混匀，有红色；右侧完全混匀，呈均匀黄色 5．  小心地将上清转移到吸附柱CP中（吸附柱放入收集管中），10,000g离心30–60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。 6．向吸附柱CP中加入500 μl去蛋白液PD，10,000g离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。 7．  向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），10,000g 离心30–60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。 8. 向吸附柱CP中加入500 μl漂洗液PW，10,000g 离心30–60秒，倒掉收集管中的废液。 9.  将吸附柱CP置于重新放回收集管中，10,000g 离心2分钟。 注：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，绝对不可省略，因为漂洗液中乙醇的残留会影响后续实验（酶切，PCR等）。 10. 将吸附柱CP置于一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加50–100 μl洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，10,000g 离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中，-20℃保存。
注： 为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入离心吸附柱中，再次离心收集。
洗脱缓冲液体积不应少于50μl，体积过小影响回收效率。
洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低 洗脱效率。
不使用Lysis Dye的标准操作步骤： 如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 1．   取1–5 ml过夜培养的菌液加入离心管中，10,000 g离心1分钟，尽量吸除上清。 注：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。 2．   向菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1（请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。 注：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。 3．  加入250 μl溶液P2，温和地上下翻转6–8次使菌体充分裂解。 注：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA；所用时间绝对不应超过5分钟，以免质粒受到破坏。 4．   加入350 μl溶液P3，立即温和地上下翻转6–8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。10,000g 离心10分钟。 注：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。 5．  小心地将上清转移到吸附柱CP中（吸附柱放入收集管中），10,000g 离心30–60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。 6．向吸附柱CP中加入500 μl去蛋白液PD，10,000g离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。 7．   向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），10,000g 离心30–60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。 7      向吸附柱CP中加入500μl漂洗液PW，10,000g 离心30–60秒，倒掉收集管中的废液。 8.  将吸附柱CP置于收集管中，10,000g 离心2分钟。 注：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，绝对不可省略，因为漂洗液中乙醇的残留会影响后续实验（酶切，PCR等）。 9．   将吸附柱CP置于一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加50–100μl洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，10,000g离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中，-20℃保存。
注： 为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入离心吸附柱中，再次离心收集。
洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。
洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。 核酸提取产品发表文章 1. [2008 IF=1.749] Development of a sequence-characterizedampli?ed region marker for diagnosis of dwarf bunt of wheat and detection ofTilletia controversa Kuhn. Author: J.H. Liu, L. Gao, T.G. Liu and W.Q. Chen Product: RTP2201 琼脂糖凝胶回收试剂盒 Journal: Letters in Applied Microbiology 2009,49,235-240 Institution：Institute ofPlant Protection ,Chinese Academy of Agricultural Sciences Paper link： https://doi.org/10.1111/j.1472-765X.2009.02645.x   2. [2009 IF=2.435] Characterization of three new S-allelesand development of an S-allele-specific PCR system for rapidly identifying theS-genotype in apple cultivars. Author: Shenshan Long, Maofu Li, Zhenhai Han, Kun Wang, Tianzhong Li Product: RTP2201琼脂糖凝胶回收试剂盒 Journal: Tree Genetics & Genomes (2010)6:161–168 Institution：ChinaAgricultural University Paper link： https://link.springer.com/article/10.1007/s11295-009-0237-6   3. [2010 IF=0.921] An ISSR-based Approach for the MolecularDetection and Diagnosis of Dwarf Bunt of Wheat, Caused by Tilletia controversaKuhn. Author: Li Gao,Wanquan Chen and Taiguo Liu Product: RTP2201 琼脂糖凝胶回收试剂盒 Journal: J Phytopathol 159:155–158 (2011) Institution：State KeyLaboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of PlantProtection, CAAS Paper link：https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1439-0434.2010.01735.x   4. [2010 IF=1.359] Curing the Plasmid pXO2 from Bacillusanthracis A16 Using Plasmid Incompatibility. Author: Huagui Wang, Xiankai Liu, Erling Feng, Li Zhu, Dongshu Wang, Xiangru Liao,Hengliang Wang Product: RTP2201 琼脂糖凝胶回收试剂盒 Journal: Curr Microbiol (2011) 62:703–709 Institution：State KeyLaboratory of Pathogen and Biosecurity, Beijing Institute of Biotechnology Paper link：https://link.springer.com/article/10.1007/s00284-010-9767-2   5. [2010 IF=1.993] Computation-assisted SiteFinding-PCR forisolating flanking sequence tags in rice Author: Hongru Wang, Jun Fang, Chengzheng Liang, Minghui He, Qiye Li, andChengcai Chu Product: RTP2201 琼脂糖凝胶回收试剂盒 Journal: BioTechniques Vol. 51 | No. 6 | 2011 Institution：Institute ofGenetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences Paper link：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22150334/   6. [2012 IF=0.903] T Polymorphisms in majorhistocompatibility complex class IIa genes are associated with resistance toinfectious hematopoietic necrosis in rainbow trout, Oncorhynchus mykiss(Walbaum, 1792). Author: Z. Liu, D.-D. Hu, S.-J. Shao, J.-Q. Huang, J.-F. Wang and J. Yang Product: RTP2202 PCR产物纯化试剂盒 Journal: J. Appl. Ichthyol. 29 (2013), 1234–1240 Institution：College ofAnimal Science and Technology, Gansu Agricultural University Paper link：https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/jai.12326   7. [2012 IF=1.958] Cloning, bioinformatics and the enzymeactivity analyses of a phenylalanine ammonia-lyase gene involved in dragon’s blood biosynthesis in Dracaenacambodiana. Author: Xing-Hong Wang，Changhe Zhang Product: RTP2202 PCR产物纯化试剂盒 Journal: Mol Biol Rep (2013) 40:97–107 Institution：Yunnan Instituteof Microbiology, Yunnan University Paper link：https://link.springer.com/article/10.1007/s11033-012-2032-y   8. [2013 IF=1.687] Tobacco Arabinogalactan Protein NtEPc CanPromote Banana (Musa AAA) Somatic Embryogenesis. Author: H. Shu & L. Xu & Z. Li & J. Li & Z. Jin & S. Chang Product: RTP2201 琼脂糖凝胶回收试剂盒 Journal: Appl Biochem Biotechnol (2014)174:2818–2826 Institution：HaikouExperimental Station, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences Paper link：https://link.springer.com/article/10.1007/s12010-014-1228-0   9. [2015 IF=1.32] Association between MHC II beta chain genepolymorphisms and resistance to infectious haematopoietic necrosis virus inrainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum, 1792). Author: Juan Yang, Zhe Liu, Hai-Na Shi, Jiu-Pan Zhang, Jian-Fu Wang, Jin-QiangHuang & Yu-Jun Kang Product: RTP2202 PCR产物纯化试剂盒 Journal: Aquaculture Research, 2016, 47,570–578 Institution：College ofAnimal Science and Technology, Gansu Agricultural University Paper link： https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/are.12516   10. [2015 IF=] A weird DNA band in PCR and its cause. Author: Chang Shenghe, Sun Wei, Zhou Zhaoxi, Li Jingyang, Dai Minjie, Shu Haiyan Product: RTP2102 普通质粒小提试剂盒 Journal: Journal of Plant Science & MolecularBreeding  Volume 5 Article 2 2016 Institution：Haikouexperimental station, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences Paper link：   11. [2017 IF=4.076] Application of Real-Time Quantitative PCRto Detect Mink Circovirus in Naturally and Experimentally Infected Minks. Author: Xingyang Cui, Yunjia Shi, Lili Zhao, Shanshan Gu, Chengwei Wei, YanYang,Shanshan Wen, Hongyan Chen and Junwei Ge Product: RTP2102 普通质粒小提试剂盒 Journal: Fronties in Microbiology May 2018 | Volume 9 | Article 937 Institution：College ofVeterinary Medicine, Northeast Agricultural University Paper link：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29867846   12. [2017 IF=3.974] In vitro and in vivo toxic e?ects and in?ammatory responses induced by carboxylatedblack carbon-lead complex exposure. Author: Shuanglin Jiang,, Mengting Shang,Kui Mu，Nan Jiang，Haiyan Wen，Rong Wang，Hai Wu，Wenyong Li Product: RTG2402 动物/细胞基因组DNA提取试剂盒 Journal: Ecotoxicology and EnvironmentalSafety 165 (2018)484–494 Institution：Key Laboratoryof Embryo Development and Reproductive Regulation of Anhui Province, FuyangNormal University Paper link：http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0147651318309011   13. [2018 IF=8.063] ATF4 destabilizes RET through nonclassicalGRP78 inhibition to enhance chemosensitivity to bortezomib in humanosteosarcoma Author: Jie Luo,# Yuanzheng Xia,# Yong Yin, Jun Luo, Mingming Liu, Hao Zhang,Chao Zhang, Yucheng Zhao, Lei Yang, and Lingyi Kong Product: RTP2101 高纯质粒小提试剂盒 Journal: Theranostics 2019, Vol. 9, Issue 21 Institution：School ofTraditional Chinese Pharmacy, China Pharmaceutical University Paper link：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31534554   14. [2020 IF=1.857] Characterization and DevelopmentalExpression Patterns of Four Hexamerin Genes in the Bumble Bee, Bombusterrestris (Hymenoptera: Apidae). Author: Yakai Tian, Yingping Qu,Kun Dong,Shaoyu He,Wu Jie, and Jiaxing Huang Product: RTP2201 琼脂糖凝胶回收试剂盒 Journal: Journal of Insect Science (2021) 21(5): 13; 1–8 Institution：Institute ofApicultural Research, Chinese Academy of Agricultural Sciences Paper link：https://doi.org/10.1093/jisesa/ieab078   15. [2020 IF=1.336] Isopentenyl Diphosphate Isomerase (IPI)Gene Silencing Negatively Afects Patchouli Alcohol Biosynthesisin Pogostemon cablin Author: Wuping Yan, Yuzhang Yang, Yougen Wu, Jing Yu, Junfeng Zhang,Dongmei Yang, Zeeshan Ul Haq Muhammad Product: RTP2102 普通质粒小提试剂盒 Journal: Plant Molecular Biology Reporter Published 27 January 2021 Institution：Collegeof Horticulture, Hainan University Paper link：https://link.springer.com/article/10.1007/s11105-020-01269-0   16. [2021 IF=6.064] Genome resequencing and transcriptomeanalysis reveal the molecular mechanism of albinism in Cordyceps militaris. Author: Ying Zhao, YuDong Liu, Xun Chen and JunXiao Product: RTG2407 真菌基因组DNA提取试剂盒 Journal: Fronties inMicrobiology.  Published 11 April 2023 Institution： Institute of Edible Fungi, LiaoningAcademy of Agricultural Sciences Paper link：https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2023.1153153/full

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