核酸快速高灵敏度染色试剂盒 产品编号 规格 贮存 RTS5101 25次 常温 储存、运输及效期 常温保存；常温运输；有效期一年。 产品简介 核酸快速高灵敏度染色试剂盒(Fast and High Sensitivity Stain Kitfor Nucleic Acids)是一种快速简单、可用于聚丙烯酰胺凝胶中的核酸检测的试剂盒。该方法检测灵敏度比 EB 高达 200 倍，能检测到10ng的 DNA条带，常用于检测 SSR 标记、SNP 标记等。 本试剂盒可足够用于25块常规的8×10cm凝胶的染色。 说明书后附有实验记录表格，方便记录实验步骤。 产品组成： 产品编号 产品名称 规格 贮存 RTS5101-1 试剂A-增敏液（10×） 250 ml 常温 RTS5101-2 试剂B-加速液（10×） 250 ml 常温 RTS5101-3 试剂C-染色溶液(100×) 26 ml 常温，避光 RTS5101-4 试剂D-基本显色液(10×) 250 ml 常温 RTS5101-5 试剂E-显色加速液(500×) 5 ml 常温，避光 注意事项： 1. 由于染色非常灵敏，操作时请注意尽量使用高纯度的水，并确保所使用的器皿非常清洁，最好使用洁净的玻璃器皿。操作时必须戴手套，避免皮肤和凝胶直接接触。 2. 需自备无水乙醇及MilliQ级纯水。 3. 下述使用说明中各种溶液的使用量适用于大小为8×10cm厚度为0.75-1mm的凝胶。对于更大的凝胶，各种溶液的使用量需按凝胶面积的比例放大，对于更厚的凝胶，作用时间需按照厚度的比例适当延长。 4. 本说明书所指的常温温度为20-25℃，操作温度较低时由于溶液的扩散能力下降，各步骤需适当延长时间。 5. 基本显色液(10×)在低温环境下可能会出现沉淀，可在37℃水浴中溶解，并充分混匀后使用。 使用方法： 一. 漂洗步骤： 电泳结束后，凝胶中加入100 ml MilliQ级纯水，在摇床上常温摇动2分钟，摇动速度为60-70rpm；重复此步骤1次。 二. 染色步骤： 2.1 染色： 弃水，加入100 ml即用型染色液，在摇床上常温摇动5分钟，摇动速度为60-70 rpm。 即用型染色液配制量 100 ml 超纯水 79 ml 试剂A-增敏液（10×） 10 ml 试剂B-加速液（10×） 10 ml 试剂C-染色溶液(100×) 1 ml 注：即用型染色液配制后需在20分钟内使用。 2.2 水洗涤： 弃原有溶液，加入100 ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动15-20秒，摇动速度为60-70rpm。 注意：水洗涤的时间不能超过20秒。 三. 显色步骤： 弃水，加入100 ml显色液，在摇床上室温摇动3-10分钟，直至出现比较理想的预期核酸条带，摇动速度为60-70rpm。 显色液配制量 100 ml 超纯水 89.8 ml 试剂D-基本显色液(10×) 10 ml 试剂E-显色加速液(500×) 0.2 ml 注：显色加速液(500X)有刺激性气味，建议在通风橱内操作； 显色液配制后需在20分钟内使用。 四. 终止步骤： 弃显色液，加入100 ml MilliQ级纯水，在摇床上常温摇动3-5分钟，摇动速度为60-70 rpm。 五. 保存： 可在MilliQ级纯水中保存；或采用适当的方式制备成干胶。 常见问题： 一. 背景太深： 1.1 显色时间过长。通常显色反应会在10分钟内结束，显色反应时间过长会导致背景很深。 1.2水的纯度太低。需使用大于16MΩ·cm的高纯度水。 二. 核酸条带非常浅： 2.1 染色后水洗涤时间过长。在染色溶液染色后需严格控制水洗涤的时间，水洗涤的时间不能超过20秒，否则会导致过多的染色离子被洗去，导致检测灵敏度下降。 2.2显色加速液（500×）失效。显色加速液（500×）不能低温保存，低温保存会导致加速液失效。 三. 凝胶上出现小点或其它非核酸的痕迹： 3.1 凝胶没有充分被溶液浸没。请注意选择大小合适的容器，并加入足量的各种溶液，同时需保持适当的混匀速度确保凝胶可以被溶液浸没。 3.2 用于染色的容器没有充分洗涤干净。容器需先用洗涤剂充分洗涤，随后用自来水充分冲洗，最后用高纯度水再洗涤数次。该容器最好能专用于染色，并注意避免各种可能的污染。 3.3 指纹或其它压痕。请注意戴手套操作，切勿直接接触皮肤。操作时请注意尽量勿挤压、折叠或摩擦凝胶。 3.4 有金属物质接触凝胶。金属物质例如金属镊子等接触凝胶会出现非特异性痕迹。 实验记录表格 实验日期： 约25-30分钟 标记√ 起始时间 一 漂洗步骤 水漂洗 2×2 min 二 染色步骤 染色 5 min 水漂洗 ＜1 min 三 显色步骤 显色 3-10 min 四 终止步骤 水漂洗 5 min 五 保存 实验示例 1 Anovel label-free fluorescence aptasensorfor dopamine detection based on an Exonuclease III- and SYBR Green I- aidedamplification strategy. Yanxian Wang, Kai Kang, Sui Wang,Weijun Kang, Cheng Cheng, Ling Mei Niu，Zhiyong Guo. Sensorsand Actuators B: Chemical Available online 01 November 2019 https://doi.org/10.1016/j.snb.2019.127348 2 A robust photoluminescence screening assay identifies uracil-DNA glycosylase inhibitors against prostate cancer. Guodong Li，Chung-Hang Leung. Chem. Sci.,2020, 11,1750–1760 DOI: 10.1039/c9sc05623h 3 A novel resonance Rayleigh scattering aptasensor for dopamine detection based on an Exonuclease III assisted signal amplification by G - quadruplex nanowires formation. Yanxian Wang，Yongzhi Guo Arabian Journal of Chemistry (2020) 13, 6598–6605
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