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DNA尿素-PAGE电泳试剂盒
DNA尿素-PAGE电泳试剂盒
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TBE-尿素-PAGE电泳可以选择RTM501 单链DNA Marker(25-75 nt)作为分子量标准。  DNA尿素PAGE电泳试剂盒(货号RTE4102)                        DNA Urea PAGEElectrophoresis Kit
产品组成:  货号 名称 规格 保存条件 AC2914 40%PAA(29:1) 100 ml 4℃ TB001 5×TBE 500 ml RT RU5080 尿素(电泳级) 220 g RT AP020P APS(干粉) 5 ml RT (配制后-20℃贮存) TA0761 TEMED 0.5 ml 4℃,避光 DL080 2×TBE尿素上样缓冲液 (尿素变性胶) 1 ml 4℃
产品简介: DNA尿素 PAGE 电泳是研究寡核苷酸电泳的重要研究手段。可以检测2-500碱基的寡核苷酸片段,理论上可以分辨出相差一个核苷酸的片段。 本公司提供的DNA尿素PAGE电泳试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制各种浓度的PAGE胶,使用方便。 按照每次制备7 ml 8%凝胶(大小10×8cm,1mm厚度)计算,试剂盒可使用至少60次。
贮存和运输:     试剂盒按照标签温度贮存,有效期一年。试剂盒常温运输。
使用说明: 一、制备凝胶: 10% APS配制-5 ml: 将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中,彻底溶解后分装,1 ml/支,-20℃备存,每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间,以防失效。10%APS在4℃有效期为一周,-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20度保存的10% APS。 1.1.参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。 1.2.分离胶配制:根据表格一,将不同体积的成分混合,漩涡搅拌至尿素彻底溶解。 表一 TBE-尿素PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml,适用于厚度1.0 mm小板胶) 单链DNA长度 最佳凝胶浓度 尿素(克) 40%PAA (29:1) 5×TBE 补水到总体积 10%APS TEMED 200-1000 nt 5% 2.1克 0.625 ml 1 ml 5 ml 50 μl 5 μl 50-400 nt 8% 2.1克 1 ml 1 ml 5 ml 50 μl 5 μl 30-300 nt 10% 2.1克 1.25 ml 1 ml 5 ml 50 μl 5 μl 10-150 nt 15% 2.1克 1.875 ml 1 ml 5 ml 50 μl 5 μl 1.3在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层,使凝胶表面保持平整。 1.4静置10-20分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,说明凝胶已聚合。 注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。 1.5去除覆盖在分离胶上的水层;按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合;最后加入10%过硫酸铵和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。 表二 TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表 (总体积2 ml,适用于1.0mm厚度胶) 各组份体积(ml) 凝胶浓度 尿素 40%PAA(29:1) 5×TBE 灭菌水 10%APS TEMED 4% 0.84克 0.2 ml 0.4 ml 补水至体积2 ml 20 μl 2 μl 1.6将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端;将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。 1.7静置30-60分钟,等待浓缩胶聚合。 注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。 二、电泳: 2.1. 预电泳:拔出梳子,用1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次,去除残余的尿素。电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200 V预电泳30分钟。 注:试剂盒配套的5×TBE缓冲液仅够配制凝胶用,1×TBE电泳缓冲液请自己制备,配方如下: 终浓度 顺序 原料 1升 5 升 89 mM 1 Tris碱 [MW121.14] 10.8 克 54克 2 mM 2 EDTA 2Na·2H2O [MW372.24] 0.744 克 3.72克 89 MM 3 硼酸 [MW61.83] 5.5 克 27.5克   4 超纯水最后定容至 1 升 5 升     最后pH在8.2-8.3之间,可以不用调节pH,记录每批pH 2.2. 取 3-5 μl样品,加入等体积2×TBE尿素上样缓冲液,70℃处理5 分钟后立即冰浴,上样。 2.3.  连接电源线,打开电源开关,按照以下条件电泳。   恒电压 起始电流 结束电流 电泳时间 适用条件 推荐电压 200V 15-20 mA/板胶 10-15 mA/板胶 60+ min 最佳电压,最优的分辨率 2.4.  等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳,取出凝胶进行后续实验。 三、染色: 3.1 单链DNA可以用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒(货号:RTS5103),核酸PAGE电泳染色试剂盒(货号:RTS5102)或核酸快速银染试剂盒(货号:RTS5101)进行染色。
实验示例: 1.   使用单链DNAPAGE电泳染色试剂盒(货号:RTS5103)染色:                             2.    使用核酸PAGE电泳染色试剂盒(货号:RTS5102)染色:                    3 使用RealSafe Red核酸染料(货号:GR002)染色:
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