Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒 (U型板3-12%预制胶，通用型) Blue/Clear Native PAGE Electrophoresis Kit Ver.710368 货号 名称 包装 RTD6139-0312 Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒 (U型板3-12%预制胶，通用型) 10 次 货品内容： 组份 货号 名称 规格 保存 1 RTD6138-0312 3-12% RealPAGE Native BN/CN 预制胶(12 孔) (U型板，通用型) 10板 4℃ 2 BC500P 10×BN/CN PAGE电泳缓冲液（干粉） 500 ml RT 3 PL114 4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液 1 ml -20℃ 4 BC250 0.4% G-250染料（电泳用） 100 ml 4℃ 5 BC260 5% G-250染料（上样用） 1 ml 4℃ 6 说明书 一份 产品简介： Blue/Clear Native PAGE（BN/CN-PAGE）是一种从生物样品（质膜，胞浆等）中分离分子量10 kD-10 M kD 范围的蛋白质复合物的电泳技术。其原理是用温和去污剂(如 DDM，digitonin)将蛋白复合体从细胞膜中以近似天然的状态分离出来，Blue Native PAGE （BN-PAGE）是用考马斯亮蓝 G-250 代替 SDS与蛋白结合而使其带负电荷，根据蛋白分子量不同在 PAGE胶中得到分离；Clear Native PAGE（CN-PAGE）是电泳缓冲液中不加入任何染料，电泳中始终保持蛋白的天然电荷和活性状态，然而，其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外，BN-PAGE由于考马斯亮蓝G-250存在，使蛋白都覆盖上负电荷，可以分离碱性蛋白（pI＞7）；而CN-PAGE只适合于酸性蛋白（pI＜7）的分离。 本产品包括BN/CN-PAGE制胶的所有成分，方便使用。可以用于分离分子量在 10 kD-10M kD 的蛋白复合体，样品可以来于胞浆、细胞总裂解液、细胞膜、线粒体膜和叶绿体膜等。电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交、SDS-PAGE电泳、蛋白纯化、蛋白活性检测等分析实验，也可直接用于电洗脱制备蛋白。 运输和贮存： 本产品常温运输；组份按照标签温度贮存；有效期一年。 使用说明： 1. 样品制备： 该试剂盒不含样品制备的相关试剂，样品具体制备方法参考Blue Native PAGE. Wittig I, Braun H, Schagger H. Nature Protocols. Vol 1,No 1,418,2006. 2. 电泳： 2.1 拆开预制胶包装，将预制胶安装在合适的电泳槽中。 注：伯乐Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向（下图）。 六一其他系列，君意东方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等电泳槽可以直接使用预制胶。 不兼容Thermol系列电泳槽。 2.2 准备电泳缓冲液： 将10×BN/CN PAGE电泳缓冲液（干粉）溶于500 ml灭菌水中，彻底溶解，测定pH应为7.0左右，不要调节pH。用前稀释10倍即配成1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。 2.2.1 CN-PAGE电泳： 阳极缓冲液和阴极缓冲液均直接使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液进行电泳。 2.2.2 BN-PAGE电泳： 阳极缓冲液使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液，阴极缓冲液按照下表配制： 1×蓝色阴极缓冲液 150 ml 10×BN/CN PAGE电泳缓冲液 15 ml 0.4% G-250 染料（电泳用） 0.75 ml 超纯水 定容至150 ml 2.3准备样品： 2.3.1 CN-PAGE电泳： 总体积 10 μl 蛋白样品 x μl 4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液 2.5 μl 超纯水 补至10 μl 不要加热 2.3.2 BN-PAGE电泳： 注：以下以植物类囊体膜蛋白电泳为例。 总体积 10 μl 10 μl 含去垢剂样品* 不含去垢剂样品 植物类囊体膜蛋白样品（DM复溶） x μl x μl 4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液 2.5 μl 2.5 μl 5% G-250染料（蛋白上样） 0.25-1 μl 0.1 μl（终浓度0.05%） 超纯水 补至10 μl 补至10 μl 不要加热 不要加热 * 含去垢剂样品中染料加入按照以下原则： 样品中G250终浓度为去垢剂终浓度的1/4。 例如样品中DDM终浓度为1%，则需要G-250终浓度为0.25%。10 μl蛋白样品中需要加5% G-250染料0.5 μl。 2.4电泳过程； 2.4.1 CN-PAGE电泳： 电泳内外槽均使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。在电泳槽的内槽内加入1×BN/CN PAGE电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻拨出预制胶梳子，用1ml吸头冲洗加样孔3次，随后在电泳槽外槽加入适量的1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。 CN-PAGE电泳 恒电压 起始电流 结束电流 电泳时间 120V 10-15mA/板胶 4-10mA/板胶 50+min 注：冰浴电泳 2.4.2 BN-PAGE电泳： BN-PAGE电泳外槽使用1×BN/CN电泳缓冲液；内槽开始电泳使用的是1×蓝色阴极缓冲液，冰浴电泳，等待电泳指示前沿到达凝胶1/3处时，将电泳缓冲液更换为1×BN/CN电泳缓冲液，继续后续电泳，因为过多染料会影响蛋白在凝胶中的迁移以及蛋白后续的转膜实验。 BN-PAGE电泳条件（一板胶） 恒电压 起始电流 电泳时间 缓冲液 120 V 8-15 mA 20-25 min 1×蓝色阴极缓冲液 冰浴电泳 指示前沿至凝胶三分之一处，更换内槽缓冲液为1×BN/CN 电泳缓冲液 恒电压 继续电泳时间 结束电流 缓冲液 120 V 45 min + 3-5 mA 1×BN/CN电泳缓冲液 冰浴电泳 3. 转膜： BN-PAGE转膜必须用PVDF膜，不能用NC膜，因为NC膜与G-250结合非常紧密。 转膜缓冲液使用推荐使用10×BN转膜缓冲液。 4. 染色： 4.1 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量FastBlue蛋白染色液或常规考马斯亮蓝染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），条带1-2分钟即可见。 4.2 摇床常温摇动10-15分钟至条带清晰可见。 4.3 加入适量蒸馏水脱色，期间更换1-2次蒸馏水，摇床常温摇动10-15分钟至背景干净。 4.4 观察保存结果。 5. 实验示例： RealPAGE Native BN/CN 预制胶 使用该产品发表部分文章列表： 1. [2021 IF=10.15] SlRIP1b is a global organellar RNA editingfactor, required for normal fruit development in tomato plants Author: Jinyan Li, KeruWang, Yongfang Yang, Yao Lu, Kaicheng Cui, Yajing Ji,Liqun Ma,Ke Cheng, Oren Ostersetzer-Biran, Feng Li, Guiqin Qu, Benzhong Zhu,Daqi Fu,Yunbo Luo,Hongliang Zhu 植物材料：西红柿线粒体蛋白 Journal: New Phytologist (2023) 237:1188–1203 Institution： College of FoodScience and Nutritional Engineering, China Agricultural University Paper link： https://nph.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/nph.18594
COA搜索：
免责申明：
本网站所提供的信息，只供参考之用。
本网站及其雇员一概毋须以任何方式就任何信息传递或传送的失误、不准确或错误对用户或任何其他人士负任何直接或间接的责任。
在法律允许的范围内，本网站在此声明,不承担用户或任何人士就使用或未能使用本网站所提供的信息或任何链接或项目所引致的任何直接、间接、附带、从属、特殊、惩罚性或惩戒性的损害赔偿（包括但不限于收益、预期利润的损失或失去的业务、未实现预期的节省）。
本网站所提供的信息，若在任何司法管辖地区供任何人士使用或分发给任何人士时会违反该司法管辖地区的法律或条例的规定或会导致本网站或其第三方代理人受限于该司法管辖地区内的任何监管规定时，则该等信息不宜在该司法管辖地区供该等任何人士使用或分发给该等任何人士。用户须自行保证不会受限于任何限制或禁止用户使用或分发本网站所提供信息的当地的规定。
本网站图片，文字之类版权申明，因为网站可以由注册用户自行上传图片或文字，本网站无法鉴别所上传图片或文字的知识版权，如果侵犯，请及时通知我们，本网站将在第一时间及时删除。
凡以任何方式登录本网站或直接、间接使用本网站资料者，视为自愿接受本网站声明的约束。
通用销售条款
一． 买方对产品的使用：产品应当用于实验室研究目的，不可用作其他用途（包括但不限于：体外诊断、食品、药物、医疗器械、人用或兽用治疗、化妆品或其他商业用途）。购买方应明确清楚知道此声明，并严格遵守。如有任何因购买方隐瞒真实购买意图，由此引起的法律责任以及一切法律后果，由购买方承担。
二． 准确订货：下订单时，买方应预先仔细审阅产品的技术指标，确认无误。不详之处应立即查询。订单及产品一经发出，即视为买方认可有关产品的技术指标。
三． 质量责任：我司保证所供产品质量与随货COA所列标准相符。买方应以产品制造商的标准作为验收标准。鉴于化学品的特殊性，卖方对未使用之前的产品质量负责，对化学品的应用不负有任何直接与间接的责任。卖方提醒买方：在做实验之前，预先按照技术规范检验产品质量。在产品开始使用之后，买方对应用及其结果负有全部责任。若有质量异议，买方需在收到货物后10个工作日内书面通知卖方，过期无效。
四． 有限保证：在适用法律允许的最大限度内，卖方提供的产品均“按现状条件”提供给买方，卖方不作对产品和/或其使用的各种明示或默示的保证（包括但不限于对适销性、适合用于特殊用途及不侵权的所有明示或默示保证）或卖方产品会达到任何特定结果或不会被中断或不会有错误的保证。
五． 责任限制：在适用法律允许的最大限度内，卖方不对以任何方式由本合同、卖方产品或使用卖方产品引起的或与此有关的任何利润或收入损失或其他后果性损失、随附性损失、特殊损失、惩罚性损失或任何其他间接损失或损害承担责任。在适用法律允许的最大限度内，卖方的最高赔偿限额为买方就所涉及的卖方产品实际支付给卖方的价格。
六． 如卖方因不可抗拒力原因无法供货，卖方将及时通知买方，双方将视情况决定部分不履行、全部不履行或延期履行；如供货期限届满日为国内外重大节日或国家法定假日，则供货期限顺延；若因缺货导致延期交货或无法供货，卖方将及时告知买方，并不视为卖方违约。不可抗力：因火灾、洪水、风暴、爆炸、恐怖事件、战争、政府行为或任何其他卖方无法预见、无法避免和无法克服的事件造成延期交货或无法交货的，卖方不承担任何责任。
订购方式：
（1）直接注册www.ruichubio.com网站会员后直接在线订购支持支付宝、微信和公务卡支付；
（2）拨打021-59145618订购热线订购;
（3）登录www.ruichubio.com下载中心下载订购单发送至：order@ruichubio.com订购
注：在邮件确认合同或订购单情况下，可以货物和发票一起寄送，对公转账。
发票：
本公司出具增值税普通发票和增值税专用发票，适合您报销。发票面额为含税后的货物价格和运费，请您放心购买，我们会将运费开进发票里。请在拍下时在备注一栏里写上发票抬头。
支付：
开票账户：
公司名称 上海瑞楚生物科技有限公司
电话 021-60543596
纳税人识别号 91310116057685530X
开户银行全称 中国银行股份有限公司上海市长宁支行
帐号 454663168779
支付宝转账请支付到如下账户
帐 户 名 上海瑞楚生物科技有限公司
账 号 epay@ruichubio.com
为了方便高校科研单位公务卡结算，本网站开通了公务卡支付。可以在线下单选择支付宝付款，登录支付宝账号添加银行卡（输入公务卡号就可以）（公务卡一般就是信用卡,请按信用卡支付方式支付)。
运输：
（1）生物试剂需要冷冻运输，运输需要泡沫盒和一定量的冰袋（特殊商品需要干冰），运费金额会开进发票里。运费以显示为准
（2）常规试剂采用快递，运费以显示为准。
（3）大物件一般默认发德邦物流，运费需联系客服计算。
本网站所提供的信息，只供参考之用。
本网站及其雇员一概毋须以任何方式就任何信息传递或传送的失误、不准确或错误对用户或任何其他人士负任何直接或间接的责任。
在法律允许的范围内，本网站在此声明,不承担用户或任何人士就使用或未能使用本网站所提供的信息或任何链接或项目所引致的任何直接、间接、附带、从属、特殊、惩罚性或惩戒性的损害赔偿（包括但不限于收益、预期利润的损失或失去的业务、未实现预期的节省）。
本网站所提供的信息，若在任何司法管辖地区供任何人士使用或分发给任何人士时会违反该司法管辖地区的法律或条例的规定或会导致本网站或其第三方代理人受限于该司法管辖地区内的任何监管规定时，则该等信息不宜在该司法管辖地区供该等任何人士使用或分发给该等任何人士。用户须自行保证不会受限于任何限制或禁止用户使用或分发本网站所提供信息的当地的规定。
本网站图片，文字之类版权申明，因为网站可以由注册用户自行上传图片或文字，本网站无法鉴别所上传图片或文字的知识版权，如果侵犯，请及时通知我们，本网站将在第一时间及时删除。
凡以任何方式登录本网站或直接、间接使用本网站资料者，视为自愿接受本网站声明的约束。
通用销售条款
一． 买方对产品的使用：产品应当用于实验室研究目的，不可用作其他用途（包括但不限于：体外诊断、食品、药物、医疗器械、人用或兽用治疗、化妆品或其他商业用途）。购买方应明确清楚知道此声明，并严格遵守。如有任何因购买方隐瞒真实购买意图，由此引起的法律责任以及一切法律后果，由购买方承担。
二． 准确订货：下订单时，买方应预先仔细审阅产品的技术指标，确认无误。不详之处应立即查询。订单及产品一经发出，即视为买方认可有关产品的技术指标。
三． 质量责任：我司保证所供产品质量与随货COA所列标准相符。买方应以产品制造商的标准作为验收标准。鉴于化学品的特殊性，卖方对未使用之前的产品质量负责，对化学品的应用不负有任何直接与间接的责任。卖方提醒买方：在做实验之前，预先按照技术规范检验产品质量。在产品开始使用之后，买方对应用及其结果负有全部责任。若有质量异议，买方需在收到货物后10个工作日内书面通知卖方，过期无效。
四． 有限保证：在适用法律允许的最大限度内，卖方提供的产品均“按现状条件”提供给买方，卖方不作对产品和/或其使用的各种明示或默示的保证（包括但不限于对适销性、适合用于特殊用途及不侵权的所有明示或默示保证）或卖方产品会达到任何特定结果或不会被中断或不会有错误的保证。
五． 责任限制：在适用法律允许的最大限度内，卖方不对以任何方式由本合同、卖方产品或使用卖方产品引起的或与此有关的任何利润或收入损失或其他后果性损失、随附性损失、特殊损失、惩罚性损失或任何其他间接损失或损害承担责任。在适用法律允许的最大限度内，卖方的最高赔偿限额为买方就所涉及的卖方产品实际支付给卖方的价格。
六． 如卖方因不可抗拒力原因无法供货，卖方将及时通知买方，双方将视情况决定部分不履行、全部不履行或延期履行；如供货期限届满日为国内外重大节日或国家法定假日，则供货期限顺延；若因缺货导致延期交货或无法供货，卖方将及时告知买方，并不视为卖方违约。不可抗力：因火灾、洪水、风暴、爆炸、恐怖事件、战争、政府行为或任何其他卖方无法预见、无法避免和无法克服的事件造成延期交货或无法交货的，卖方不承担任何责任。
订购方式：
（1）直接注册www.ruichubio.com网站会员后直接在线订购支持支付宝、微信和公务卡支付；
（2）拨打021-59145618订购热线订购;
（3）登录www.ruichubio.com下载中心下载订购单发送至：order@ruichubio.com订购
注：在邮件确认合同或订购单情况下，可以货物和发票一起寄送，对公转账。
发票：
本公司出具增值税普通发票和增值税专用发票，适合您报销。发票面额为含税后的货物价格和运费，请您放心购买，我们会将运费开进发票里。请在拍下时在备注一栏里写上发票抬头。
支付：
开票账户：
公司名称 上海瑞楚生物科技有限公司
电话 021-60543596
纳税人识别号 91310116057685530X
开户银行全称 中国银行股份有限公司上海市长宁支行
帐号 454663168779
帐 户 名 上海瑞楚生物科技有限公司
账 号 epay@ruichubio.com
为了方便高校科研单位公务卡结算，本网站开通了公务卡支付。可以在线下单选择支付宝付款，登录支付宝账号添加银行卡（输入公务卡号就可以）（公务卡一般就是信用卡,请按信用卡支付方式支付)。
运输：
（1）生物试剂需要冷冻运输，运输需要泡沫盒和一定量的冰袋（特殊商品需要干冰），运费金额会开进发票里。运费以显示为准
（2）常规试剂采用快递，运费以显示为准。
（3）大物件一般默认发德邦物流，运费需联系客服计算。
