RealPAGE Native BN/CN 预制胶(U型板，通用型，12孔) RealPAGE Native BN/CN Precast Gels(U Type Plate,Universal,12 Wells) 货品规格： 货号 名称 分离范围 规格 保存 RTD6138-0312 3-12% RealPAGE Native BN/CN 预制胶 (U型板，通用型，12 孔) 30-10000 kD 10板 4℃ RTD6138-0416 4-16% RealPAGE Native BN/CN 预制胶 (U型板，通用型，12 孔) 15-1000 kD 10板 4℃ 产品简介： Blue/Clear Native PAGE（BN/CN-PAGE）是一种从生物样品（质膜，胞浆等）中分离分子量10 kD-10000 kD 范围的蛋白质复合物的电泳技术。其原理是用温和去污剂(如 DDM，digitonin)将蛋白复合体从细胞膜中以近似天然的状态分离出来，Blue Native PAGE （BN-PAGE）是用考马斯亮蓝 G-250 代替 SDS与蛋白结合而使其带负电荷，根据蛋白分子量不同在 PAGE胶中得到分离；Clear Native PAGE（CN-PAGE）是电泳缓冲液中不加入任何染料，电泳中始终保持蛋白的天然电荷和活性状态，然而，其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外，BN-PAGE由于考马斯亮蓝G-250存在，使蛋白都覆盖上负电荷，可以分离碱性蛋白（pI＞7）；而CN-PAGE只适合于酸性蛋白（pI＜7）的分离。 本产品可以用于分离分子量在 10 kD-10000 kD 的蛋白复合体，样品可以来于胞浆、细胞总裂解液、细胞膜、线粒体膜和叶绿体膜等。电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交、SDS-PAGE电泳、蛋白纯化、蛋白活性检测等分析实验，也可直接用于电洗脱制备蛋白。 运输和贮存： 本产品常温运输；凝胶4-8℃贮存，不要冷冻；有效期12个月。 使用说明： 一. 样品制备： 样品具体制备方法参考Blue Native PAGE. Wittig I, Braun H, Schagger H. Nature Protocols. Vol 1,No 1,418,2006. 二. 电泳： 2.1 拆开预制胶包装，将预制胶安装在合适的电泳槽中。 注：伯乐Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向（下图）。 六一其他系列，君意东方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等电泳槽可以直接使用预制胶。 不兼容Thermol系列电泳槽。 2.2 准备电泳缓冲液： 10×BN/CN电泳缓冲液稀释10倍即配成1×BN/CN电泳缓冲液。 2.2.1 CN-PAGE电泳： 内槽缓冲液（阴极缓冲液）和外槽缓冲液（阳极缓冲液）均直接使用1×BN/CN电泳缓冲液进行电泳。 2.2.2 BN-PAGE电泳： 外槽缓冲液使用1×BN/CN电泳缓冲液，内槽缓冲液按照下表配制： 1×蓝色阴极缓冲液 150 ml 10×BN/CN电泳缓冲液 15 ml 0.4% G-250 染料（电泳用） 0.75 ml 超纯水 定容至150 ml 2.3准备样品： 2.3.1 CN-PAGE电泳： 总体积 10 μl 蛋白样品 x μl 4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液 2.5 μl 超纯水 补至10 μl 不要加热 2.3.2 BN-PAGE电泳： 注：以下以植物类囊体膜蛋白电泳为例。 总体积 10 μl 10 μl 含去垢剂样品* 不含去垢剂样品 蛋白样品 x μl x μl 4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液 2.5 μl 2.5 μl 5% G-250染料（蛋白上样） 0.25-1 μl 0.1 μl（终浓度0.05%）或不加 超纯水 补至10 μl 补至10 μl 不要加热 不要加热 * 含去垢剂样品中染料加入按照以下原则： 样品中G250终浓度为去垢剂终浓度的1/4。 例如样品中DDM终浓度为1%，则需要G-250终浓度为0.25%。10μl蛋白样品中需要加5%G-250染料0.5μl。 2.4电泳过程； 2.4.1 CN-PAGE电泳： 电泳内外槽均使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。在电泳槽的内槽内加入1×BN/CN PAGE电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻拨出预制胶梳子，用1ml吸头冲洗加样孔3次，随后在电泳槽外槽加入适量的1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。 CN-PAGE电泳 恒电压 起始电流 结束电流 电泳时间 120V 10-15mA/板胶 4-10mA/板胶 50+min 注：冰浴电泳 2.4.2 BN-PAGE电泳： BN-PAGE电泳外槽使用1×BN/CN电泳缓冲液；内槽开始电泳使用的是1×蓝色阴极缓冲液，冰浴电泳，等待电泳指示前沿到达凝胶1/3处时，将电泳缓冲液更换为1×BN/CN电泳缓冲液，继续后续电泳，因为过多染料会影响蛋白在凝胶中的迁移以及蛋白后续的转膜实验。 BN-PAGE电泳条件（一板胶） 恒电压 起始电流 电泳时间 缓冲液 120 V 8-15 mA 20-25 min 1×蓝色阴极缓冲液 冰浴电泳 指示前沿至凝胶三分之一处，更换内槽缓冲液为1×BN/CN 电泳缓冲液 恒电压 继续电泳时间 结束电流 缓冲液 120 V 45 min + 3-5 mA 1×BN/CN电泳缓冲液 冰浴电泳 三. 实验示例： BN-PAGE 3-12% Precast Gel 恒压 120V 1.5 小时 冰浴电泳 BN-PAGE4-16% Precast Gel 恒压120V 2 h 1×BN/CN电泳缓冲液冰浴电泳 RealPAGE Native BN/CN 预制胶 使用该产品发表部分文章列表： 1. [2021 IF=10.15] SlRIP1b is a global organellar RNA editingfactor, required for normal fruit development in tomato plants Author: Jinyan Li, KeruWang, Yongfang Yang, Yao Lu, Kaicheng Cui, Yajing Ji,Liqun Ma,Ke Cheng, Oren Ostersetzer-Biran, Feng Li, Guiqin Qu, Benzhong Zhu,Daqi Fu,Yunbo Luo,Hongliang Zhu 植物材料：西红柿线粒体蛋白 Journal: New Phytologist (2023) 237:1188–1203 Institution： College of FoodScience and Nutritional Engineering, China Agricultural University Paper link： https://nph.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/nph.18594
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