非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒（货号:RTD6130） Native PAGE GelPreparation and Electrophoresis Kit
产品组成： 货号 名称 规格 保存条件 AC2913-01 30%PAA(29:1) 100 ml 4℃ RTD6130-02 4×分离胶缓冲液 pH8.8 100 ml RT RTD6130-03 4×浓缩胶缓冲液 pH6.8 50 ml RT AP020P APS（干粉） 0.5 g RT TA0761-01 TEMED 0.5 ml 4℃，避光 PL111 5×非变性非还原蛋白上样缓冲液 1 ml -20℃ TG130P 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（干粉） 1L RT
产品简介： 本公司提供的非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水。本试剂盒可用于配制非变性(native)PAGE凝胶。本试剂盒可配制30-50块常规大小的非变性PAGE胶。 特别说明：由于本系统采用非连续Laemmli凝胶系统，分离胶pH为8.8，因此要求待分离的蛋白等电点pI≤7.0，这样蛋白在凝胶系统内带负电荷，在凝胶电泳中才能正常向正极泳动。如果待分离的蛋白等电点pI＞7.0，请选择碱性电泳凝胶系统分离（货号RTD6131）。
使用说明： 一 配制分离胶（各试剂使用量请参考表二） 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度（表一），再按照下面的分离胶配方表（表二）配制非变性PAGE的分离胶(即下层胶)。 表一 不同浓度的PAGE分离胶的最佳分离范围： SDS-PAGE分离胶浓度 最佳分离范围 6% 50-150kD 8% 30-90kD 10% 20-80kD 12% 12-60kD 15% 10-40kD 10% APS配制-5 ml： 将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。 制备分离胶步骤： 1．根据下表，将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%APS，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡 2．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。 3．静置15-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。 注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。 二 浓缩胶制备： 1．去除覆盖在分离胶上的水层。 2．按照表一将不同成分在一个小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%过硫酸铵，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。 3．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。 4．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。 5．静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。 注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。 三 电泳： 凝胶凝固好后，根据以下配方准备电泳缓冲液。 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（不含SDS）的配制-1 L：将一包5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中，加入约900 ml水彻底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（此溶液不用调节pH值）。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。 在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。上样，电泳，一般是浓缩胶80V，分离胶120V恒压，等指示前沿溴酚兰电泳到分离胶下缘后，结束电泳，染色或者进行下一步实验。 实验示例 非变性蛋白电泳相关产品发表文章 1. [2021IF=3.74] Cloning, expression, and function offerritins in the tick Haemaphysalis flava. Product: RTD6142高分子量非变性电泳蛋白质MarkerII（45-669kD） Author: Yu Zhao, Lei Liu,Jin-Bao Liu, Cong-Ying Wu, De-Yong Duan, Tian-Yin Cheng Journal: Ticksand Tick-borne Diseases. Volume 13, Issue 2, March 2022, 101892 Institution：College of Veterinary Medicine, HunanAgricultural University, Paper link：https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1877959X21002454   2. [2021 IF=6.95] Characterizingof a new α-agarase AgaE from Thalassomonas sp. LD5 and probing itscatalytically essential residues. Product: RTD6142高分子量非变性电泳蛋白质MarkerII（45-669kD） Author: JingnanXua, Zibo Cuia, Weibin Zhanga, Jingxuan Lua, Xinzhi Lua, Wengong Yu. Journal: InternationalJournal of Biological Macromolecules. Vol194,2022,50-57. Institution： Schoolof Medicine and Pharmacy, Ocean University of China Paperlink：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2021.11.194   3. [2021 IF=6.95] Ateleost interleukin-16 is implicated in peripheral blood leukocytes recruitmentand anti-bacterial immunity. Product: RTD6130 非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒 Author:Xue-peng Li, Guan-yu Chen, Jian Zhang, Deng-lai Li, Ji-xing Feng. Journal: International Journal of BiologicalMacromolecules. 2021,Vol.187, 821-829. Institution： School of Ocean, Yantai University, Yantai, China Paper link：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2021.07.151   4. [IF=17.692021] Turn air-captured CO2 with methanol into amino acid and pyruvatein an ATP/NAD(P)H- free chemoenzymatic system. Product: RTD6130 非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒; PL111 5×非变性非还原蛋白上样缓冲液; RTD6142 高分子量非变性电泳蛋白质Marker II（45-669 kD） Author: Jianming Liu, Han Zhang, Yingying Xu, HaoMeng, An-Ping Zeng. Journal: NatureCommunications. 2023，14:2772. Institution： Westlake University Paper link： http://www.nature.com/articles/s41467-023-38490-w

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