SDS-PAGE凝胶制备试剂盒（货号:RTD6123）   
产品组成： 货号 名称 规格 保存条件 AC2913-01 30%PAA(29:1) 100 ml 4℃ TS0588-100ml 1M Tris-HCl pH8.8 100 ml RT TS0568-15ml 1M Tris-HCl pH6.8 15 ml RT SD050-5ml 10% SDS 5 ml RT AP020P 10% APS（干粉） 5 ml RT 配制后-20℃贮存 TA0761-01 TEMED 0.5 ml 4℃，避光 说明书 一份
产品简介： 本公司提供的SDS-PAGE凝胶制备试剂盒包含凝胶制备所需的全部试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水。本试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶，也可用于配制非变性(Native)PAGE凝胶。本试剂盒可配制至少30-50块常规大小的PAGE胶。
使用说明： 一 配制分离胶（各试剂使用量请参考表二） 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度（表一），再按照下面的分离胶配方表（表二）配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)。 表一 不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围： SDS-PAGE分离胶浓度 最佳分离范围 6% 50-350kD 8% 35-300kD 10% 20-150kD 12% 15-100kD 15% 10-80kD 配制分离胶前，根据以下配方准备10% APS： 10% APS配制-5 ml：将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。 制备分离胶步骤： 1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。 2．根据表二，将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%APS，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。 3．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。 4．静置15-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。 注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。 表二 SDS-PAGE分离胶配方表 组份 不同凝胶体积对应各组份的取样量（ml） 6％ 胶                                  5ml           10ml          15ml           20ml                           H2O 2.05 4.1 6.15 8.2 1M Tris pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 30％ PAA（29:1） 1 2 3 4 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 TEMED 0.005 0.01 0.015 0.02 10％ APS 0.05 0.1 0.15 0.2 8％ 胶                                  5ml           10ml          15ml           20ml                           H2O 1.7 3.3 5 6.7 1M Tris pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 30％ PAA（29:1） 1.3 2.7 4 5.3 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 TEMED 0.005 0.01 0.015 0.02 10％ APS 0.05 0.1 0.15 0.2 10％ 胶                                5ml           10ml          15ml           20ml                           H2O 1.3 2.7 4 5.3 1M Tris pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 30％ PAA（29:1） 1.7 3.3 5 6.7 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 TEMED 0.005 0.01 0.015 0.02 10％ APS 0.05 0.1 0.15 0.2 12％ 胶                                5ml           10ml          15ml           20ml                           H2O 1 2 3 4 1M Tris pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 30％ PAA（29:1） 2 4 6 8 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 TEMED 0.003 0.006 0.009 0.012 10％ APS 0.05 0.1 0.15 0.2 15％ 胶                                5ml           10ml          15ml           20ml                           H2O 0.5 1 1.5 2 1M Tris pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 30％ PAA（29:1） 2.5 5 7.5 10 10% SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 TEMED 0.003 0.006 0.009 0.012 10％ APS 0.05 0.1 0.15 0.2 注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加10% SDS即可配制成非变性PAGE胶。 二 浓缩胶制备： 1．去除覆盖在分离胶上的水层。 2．按照表三将不同成分在一个小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%过硫酸铵，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。 3．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。 4．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。 5．静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。 注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。 表三 SDS-PAGE浓缩胶(5%)配方表 组份 不同凝胶体积对应各组份的取样量（ml） 2 ml 4 ml 6 ml 10 ml H2O 1.4 2.7 4.1 6.8 1M Tris pH6.8 0.25 0.5 0.75 1.25 30％ PAA（29:1） 0.33 0.67 1 1.7 10% SDS 0.02 0.04 0.06 0.1 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.01 10％ APS 0.02 0.04 0.06 0.1

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