2×GC Buffer 产品组成： 目录号 规格 价格 RTB3101-01 1ml 50元 RTB3101-02 5×1ml 200元 RTB3101-03 10×1ml 300元 保存：-20℃ 用途： PCR 扩增复杂结构的 DNA 片段。 产品说明和注意事项： 1. 本产品能与各种PCR酶配合使用，能够扩增具有复杂二级结构模板（GC rich、重复序列等）的PCR片段。 2. 使用 GC Buffer 进行 PCR 扩增时，建议使用 Tm 值较高的引物。因此，引物最好设计在 30 mer 左右。 3. 使用 GC Buffer扩增的 GC rich 的DNA 片段长度，会因 GC 含量不同而各有差异。 4. 由于 GC Buffer 和一般的PCR Buffer 相比 DNA 变性效果较强，因此，一般的 DNA片段（GC含量低于50%的目的片段）不推荐使用2×GC buffer进行扩增。 使用说明： 1.按照下表在0.2mlPCR管中制备反应体系： 成分 25μl反应体系 50μl反应体系 终浓度 Template 0.05-0.5 μg 0.1-1 μg as you wish Primer 1（10 μM） 0.5 μl 1 μl 200nM Primer 2（10 μM） 0.5 μl 1 μl 200nM 2×GC buffer 12.5 μl 25 μl 1× dNTP Mixture(10 mM) 0.5 μl 1 μl 200μM each Taq (5 U/μl) 0.25-0.5 μl 0.5-1 μl 2.5-5U ddH2O up to 25 μl up to 50 μl - 2. 混匀后，离心快甩将反应液收集到管底。 3. PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。 4. PCR仪上执行以下程序： 两步法： 步骤 温度 时间 循环数 初始变性 94℃ 5 min 1 变性 94℃ 30 sec 25-40* 退火和延伸 68℃ 1 min/kb 最后延伸 72℃ 5 min 1 *注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）。 1. 怎样确定扩增片段的GC含量大小？ 推荐使用Oligo软件分析片段的GC含量(如下图所示)。 2.2×GCbuffer能扩增正常GC含量片段吗？ 2×GCbuffer可以扩增GC含量正常的模板。然而，由于GCbuffer有比较强的变性效果，因此一般的模板使用GC buffer扩增时，有时会降低扩增效率。 3.2×GCbuffer能兼容大多数PCR用酶吗？ 2×GCbuffer能兼容大多数PCR酶，比如Taq，Taqplus，Long Taq等，可以根据片段长度以及保真性要求选择不同的酶。 4. 使用GCbuffer扩增时，为什么推荐使用两步法？ 由于目的片段GC含量高，引物的Tm值往往会比较高，在PCR时，当退火温度和延伸温度差距较小时，比如退火温度超过60℃时，退火温度和延伸温度可以设成同一数值，一般为68℃。 2×GC bufferlane 1-5: Rice 390bp fragement(GC% 77.1%)lane 6-10: Rice 760bp fragement(GC% 72.9%)lane 1 and 6: TaKaRa 2×GC buffer Ilane 2 and 7: TaKaRa 2×GC buffer IIlane 3 and 8: RTB3101 2×GC bufferlane 4 and 9: RTB3106 10×Taq PCR bufferlane 5: Rice 390bp，RTB3101 2×GC buffer, 三步法扩增lane 10: Rice 760bp，RTB3101 2×GC buffer, 三步法扩增
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