植物脯氨酸检测试剂盒(茚三酮比色法) PlantProline Assay Kit with Ninhydrin 产品组成： 组分货号 名称 规格 贮存 PP5040-01 试剂1-Pro裂解液 125 ml RT PP5040-02 试剂2-Pro标准液 1 ml 4℃ PP5040-03 试剂3-Pro显色液 50 ml 4℃ 避光 产品简介： 脯氨酸(Proline，Pro)是一种环状的α-亚氨基酸，呈中性，等电点为6.30，易溶于水。在正常环境情况下脯氨酸含量较低，但在逆境下(旱、热、冷、冻、盐碱等)，脯氨酸常有明显积累，即积累指数与植物的抗逆性有关。植物脯氨酸检测试剂盒(茚三酮比色法)检测原理是脯氨酸与茚三酮共热发生反应，能产生稳定的红色产物，以分光光度计测定处吸光度，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与脯氨酸浓度成正比。 该试剂盒不使用甲苯等有害溶剂，经济环保。 该试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量，不适用于动物及医疗样品中脯氨酸的测定。 按照一次使用1 ml Pro显色液计算，试剂盒可以使用50次。 自备材料： 植物根茎、叶子等；剪刀；螺盖离心管或锁盖离心管或96孔板；1ml玻璃比色皿；分光光度计或酶标仪；水浴锅或干浴器；离心机 操作步骤： 1、 样本处理： 取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，剪碎，迅速称取， 按照20mg重量加入1ml Pro裂解液（注意是否已经加入无水乙醇）的比例加入Pro裂解液（建议使用1.5ml螺口离心管或锁盖离心管），沸水浴或干浴处理20分钟 (期间间歇混匀)，10000 rpm离心 2分钟，上清即为脯氨酸提取液，4℃保存备用。待测提取液如不能及时测定，应置于-20℃保存，1-2天内稳定。 2、 配制系列脯氨酸标准溶液： 取1ml 试剂1-Pro裂解液全部加入到试剂2-Pro标准液的小管中，混匀后彻底溶解，即配成的Pro标准液（100mg/ml）。 取1 μl 100mg/ml 标准液加入到1ml Pro裂解液中，即配成100μg/ml Pro标准液待用。参照下表配制1-6号不同浓度的Pro标准溶液。 编号 1 2 3 4 5 6 7 8 100μg/ml Pro标准液加入量（ml） 0.01 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.15 0.2 Pro裂解液（ml） 0.49 0.48 0.46 0.44 0.42 0.4 0.35 0.3 脯氨酸含量（μg） 1 2 4 6 8 10 15 20 4、 样品测定: =1 \* GB3 ① 分光光度计测定：参考下表设置反应混合液，依次加入试剂： 编号 0 1-8 9-X 空白管 标准管 测定管 试剂1-Pro裂解液 0.5 ml - - 步骤1中的脯氨酸提取液 - - 0.5 ml Pro标准液（步骤3中1-8管） - 0.5 ml - 试剂3-Pro显色液 1 ml 1 ml 1 ml ③ 水浴煮沸或干浴20分钟，间歇混匀。加热时务必注意避免液体暴沸溅出，可使用锁盖离心管或螺旋盖离心管。 ④ 冰浴或流水冷却至室温，10000 rpm离心 2分钟，如发现没有不溶物，也可以不离心。 ⑤ 取上清，用空白管作为对照，取1ml反应混合液用分光光度计测定520nm吸光度值。 =6 \* GB3 ⑥ 酶标仪测定：参考下表设置反应混合液，依次加入试剂： 空白管 标准管 测定管 试剂1-Pro裂解液 50 μl - - 步骤1中的脯氨酸提取液 - - 50 μl Pro标准液（步骤3中1-8管） - 50 μl - 试剂3-Pro显色液 100 μl 100 μl 100 μl 5、 计算： 以系列脯氨酸标准(1-8号管)含量(μg)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据测定管的吸光度进而计算其脯氨酸含量。 如使用分光光度计测定，根据如下公式计算具体样品中脯氨酸的含量： 植物组织样品脯氨酸含量(μg/g)=1.5（C×VT）/(W×VS) =3C/W VT=步骤1中脯氨酸提取液总体积(ml)，此处为1ml W=步骤1中使用的样品鲜重(g) VS=步骤4中测定时加入的脯氨酸提取液体积(ml)，本实验为0.5ml 1.5系数为步骤4中反应混合液体积为1.5ml，取1ml测定吸光值
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