2×CTAB提取缓冲液 产品编号及规格： 货号 名称 规格 贮存 RTG2405-200ml 2×CTAB提取缓冲液 200 ml RT RTG2405-500ml 2×CTAB提取缓冲液 500 ml RT BME 还原剂 1 ml RT 说明书 一份 产品介绍： CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7M NaCl) CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物而不沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入醇（乙醇或异丙醇）沉淀即可使核酸分离出来。 2×CTAB提取缓冲液成分：2%(w/v，55 mM)CTAB，100 mM Tris (pH 8.0)，20 mM EDTA, 1.4 MNaCl,，还原剂(随用随加) 。 储存及运输： 常温贮存2年；常温运输。 实验操作步骤： 一 DNA提取： 1. 2×即用型CTAB提取液配制： 按照终浓度0.2% （v/v）加入还原剂，如1 ml 2×CTAB提取缓冲液中加入2 μl还原剂。2×即用型CTAB提取液建议现用现配。 2. 材料研磨： 取0.2-0.5克新鲜植物材料，于液氮中研磨成粉末。 3. 样品裂解： 按照每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取缓冲液的比例将粉末转入1.5ml离心管中，立即加入65℃预热的2×即用型CTAB提取缓冲液，65℃水浴30分钟，间歇混匀。 注：提取缓冲液使用量不要超过0.7 ml，否则后续纯化不能在一个离心管内完成；CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。 4. 离心去杂质： 14000 g 常温离心5分钟，转移上清至新的1.5 ml离心管中。 5. 去除RNA： 上清中加入1/100上清体积的RNaseA溶液（10mg/ml）（货号：RN001），如500μl上清中加如5 μl RNaseA溶液，37℃处理20分钟。 6. 第一次抽提纯化： 6.1 步骤5溶液中加入等体积的DNA抽提溶液I（25:24:1）（货号：PC1015），轻缓颠倒离心管混匀8-10次，常温14000 g 离心10分钟，保留上清。 6.2. 重复抽提一次。 7. 第二次纯化： 上清中加入等体积核酸抽提溶液（24:1）（货号：PC1017），颠倒离心管混匀8-10次，常温14000 g离心10分钟，保留上层水相。 8. 沉淀DNA： 8.1 将上层水相转入新的1.5 ml离心管中，加入0.6倍体积的冰冷异丙醇，轻柔混匀，-20℃静 置30分钟； 8.2 14000g4℃离心10分钟。 9. 漂洗DNA： 9.1去上清液, 加入1ml70%乙醇漂洗沉淀，4℃14000 g 3分钟，吸弃乙醇。 9.2 4℃ 14000 g 1分钟，用移液器吸尽残余乙醇，超净台吹干沉淀。 注：沉淀不能彻底干燥，否则不好溶解。 10. 贮存DNA： 加入50-100μl的超纯水或TE缓冲液（货号：TE1050）溶解DNA，-20℃保存备用。 二 RNA提取： 注：以下程序请注意所有试剂都要保证RNase-free。 1. 2×即用型CTAB提取液（RNase-free）（货号：RTG2405F）配制（现用现配）： 2×CTAB提取缓冲液中按照1/1000体积加入DEPC，如100ml中加入100 μl DEPC，混匀后过夜处理，高温高压，即为2×即用型CTAB提取缓冲液（RNase-free）。按照终浓度1 % （v/v）加入还原剂，如1 ml 2×CTAB提取缓冲液（RNase-free）中加入10 μl还原剂。2×即用型CTAB提取液建议现用现配。 2. 材料研磨： 取0.2-0.5克新鲜植物材料，于液氮中研磨成粉末。 3. 样品裂解： 按照每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取缓冲液的比例将粉末转入1.5ml离心管中，立即加入65℃预热的2×即用型CTAB提取缓冲液，65℃水浴30分钟，间歇混匀。 注：提取缓冲液使用量不要超过0.7 ml，否则后续纯化不能在一个离心管内完成；CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。 4. 离心去杂质： 14000 g 常温离心5分钟，转移上清至新的1.5 ml离心管中。 5. 第一次纯化： 上清中加入等体积的RNA抽提溶液I（25:24:1）（货号：PC1018），轻缓颠倒离心管混匀8-10次，常温14000 g 离心10分钟。 6. 第二次纯化： 将上清液转入另一1.5 ml离心管中，加入等体积核酸抽提溶液（24:1）（货号：PC1017），颠倒离心管混匀8-10次，常温14000 g离心10分钟。 7. 沉淀RNA： 将上层水相转入新的1.5 ml离心管中，加入1/2体积7.5 M LiCl（RNase-free）（货号：LC1030），轻柔混匀，-20℃ 静置30分钟；14000g4℃离心10分钟。 9. 漂洗RNA： 9.1 去上清液, 沉淀中加入1ml70%乙醇（RNase-free），吹打漂洗沉淀，14000 g4℃3分钟，吸弃乙醇。 9.2 14000 g4℃1分钟，用移液器吸尽残余乙醇，超净台吹干沉淀。 注：RNA沉淀不能过分干燥，否则不好溶解。 10. 贮存RNA： 加入50-100μl的RNase-free水（货号：RF001）溶解RNA，-80℃保存备用。 使用该产品发表部分文章列表： 1. [IF=4.35] Combined Effect of High-Pressure Processing with Spice Extracts on Quality of Low-Salt Sausage during Refrigerated Storage. Author:Qing Xiao, Mei Xu, Baocai Xu, Conggui Chen, Jieying Deng and Peijun Li Journal: Foods. 2021, 10, 2610. Institution：Hefei University of Technology Paper link：https://www.mdpi.com/2304-8158/10/11/2610 2. [IF=3.579] Effect of Lactobacillus plantarum andStaphylococcus xylosus on flavour development and bacterial communities in Chinese dry fermented sausages. Author: YaqingXiao,PeijunLi Journal: Food Research International. 2020. Institution：Hefei University of Technology Paper link：https://doi.org/10.1016/j.foodres.2020.109247
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