DAPI染色液（DAPIStain Solution,10 μg/ml） 产品组成： 组分货号 名称 规格 贮存 DA1023S DAPI染色溶液 10 ml -20℃ 说明书 一份 产品简介： DAPI染色液(DAPI Staining Solution)是适用于常见细胞和组织细胞核染色的染色液。 DAPI即 2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidinedihydrochloride，也称DAPI dihydrochloride，分子式为C16H15N5?2HCl ，MW为350.25，CAS Number 28718-90-3。 DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍，DAPI和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。 DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。 DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。 DAPI的发射光为蓝色，且DAPI和绿色荧光蛋白GFP或Texas Red染剂(红色荧光染剂)的发射波长仅有少部分重叠，可以利用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。 本DAPI染色液为即用型，浓度为10μg/ml，可以直接用于固定细胞或组织的细胞核染色。 贮存： -20℃避光保存，一年有效。 操作步骤： 一 悬浮细胞染色 1.1 500 g（2400rpm，下同）离心收集细胞样品于1.5 ml离心管内，加入0.5ml固定液（货号：KA5010，卡诺固定液），缓缓悬起细胞，常温固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。 1.2离心去尽固定液，用PBS洗两遍，每次3分钟，洗涤期间手动晃动数次。 1.3 细胞沉淀中加入200μl DAPI染色液，重悬细胞，37℃避光染色10-15分钟，手动晃动数次。 1.4 离心收集沉淀，重悬于100 μl 1×PBS中。 1.5 取5 μl抗荧光淬灭封片液（货号：AM0510）于载玻片上，加入等体积步骤1.4染色后细胞重悬液，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。 1.6 荧光显微镜下紫外激发观察可检测到呈蓝色的细胞核。 注：荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。 二 贴壁细胞染色 2.1 取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用无菌的PBS洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，生长至50%-80%满度。 2.2刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。 2.3去尽固定液，用PBS洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床或手动晃动。 2.4加入0.5ml DAPI染色液，37℃避光染色10-15分钟，手动晃动数次。 2.5去尽染色液，用PBS洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床或手动晃动。 2.6滴一滴抗荧光淬灭封片液（货号：AM0510）于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡。 2.7荧光显微镜下紫外激发观察可检测到呈蓝色的细胞核。 注：荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测 实验示例： 操作流程：使用不同浓度星饱菌素（Staurosporine，STS）凋亡处理Jurkat细胞。调整细胞密度为1×106/ml，每孔2ml接种于六孔板中；加入终浓度为0，0.1，0.5，1 μM STS，37℃ 5%CO2培养3小时；500 g 3 min收集细胞；细胞沉淀中加入1 ml固定液，常温固定10 min；1×PBS漂洗两次；细胞沉淀中加入0.5 ml DAPI染色液，37℃避光染色10 min；离心后细胞沉淀重悬于100 μl 1×PBS中；取5 μl细胞悬液滴于载玻片上，加5 μl 抗荧光淬灭剂，封片观察。凋亡细胞由于染色质固缩，细胞核呈致密浓染或碎块状致密浓染。细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学变化分三期：I期的细胞核呈波纹状（rippled）或呈折缝样（creased）（0.1 μM STS处理），部分染色质出现浓缩状态（0.5 μM STS处理）。II a期细胞核的染色质高度凝聚，边缘化；II b期的细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体（1 μM STS处理）。
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