Trypsin 1:250 from Porcine Pancreas 胰蛋白酶1:250 CAS: 9002-07-7 EC number：3.4.21.4 Storage：-20℃ Appearance…………………….white Trypsine…………………………>250NF U/mg Chymotrypsin…………………..<75NF U/mg Loss on dry……………………..<5% 说明：Trypsin is a pancreatic serine protease with substrate specificity based upon positively charged lysine and arginine side chains. Trypsin cleaves amide and ester bonds of Arg and Lys. Trypsin is one of the most highly specific proteases known, although it also exhibits some esterase and amidase activity. NF 1:250, a commonly used "trypsin" preparation, has the potency to bring about the proteolytic digestion of 250 times its weight of casein under assay conditions specified by the National Formulary. 25g 180元 胰蛋白酶（Trypsin），简称胰酶，可使细胞间的蛋白质水解从而达到细胞离散的目的，是目前应用最为广泛的消化剂，主要采自牛或猪的胰脏，呈白色粉末状，易潮解，应在低温干燥处保存。胰酶适用于细胞间质较少的软组织（如胚胎、上皮、羊膜、肝、肾等软组织）及传代细胞的消化，但对于纤维性组织或较硬的癌组织则效果较差。 胰酶活性可用消化酪蛋白的能力表示，常见有1：125和1：250，即一份胰酶可消化125或250份酪蛋白。组织培养用胰酶溶液一般配制成0.1-0.25%浓度，常用0.25%，特别敏感的可以使用0.125%。胰酶的消化效果主要于pH值、温度、胰酶的浓度、组织块的大小和硬度有关。胰酶作用及溶解的最佳pH是8-9，配制胰酶溶液可将液体调至pH8左右，充分溶解，过滤除菌，过滤后再调至pH7.4左右。胰酶作用的最适温度为37℃，在夏季室温25℃以上对一般传代细胞也能达到消化效果。一般新鲜配制的胰酶消化能力较强。 消化时间要根据不同的情况而定，胰酶对细胞的分离效果与细胞的类型、特性和瓶壁表面特性有关。一般来说，温度低，组织块大、胰酶浓度低者，消化时间长，反之则相应减少时间。酶的浓度过大或消化时间太长，会导致消化过度，对细胞的活性损伤较大，并有部分细胞漂浮，被消化掉；消化时间太短，消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下，反复吹打同样也会损伤细胞活性，也达不到分散细胞的目的。影响消化速度的因素较多，主要有胰酶溶液的活性（配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等）、消化时的温度（气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度）以及所加胰酶溶液的多少等。在使用胰酶进行消化时，可改变不同参数以确定出最佳消化效果。 胰酶的配置方法 1.称取胰酶：按胰酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入PBS或D-hanks中，低速搅拌3-4小时或者置于4℃过夜混匀（低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫严重，有可能导致酶的变性）。 2.调节pH值为7.4左右。用注射滤器过滤除菌，因蛋白制剂不宜4℃长期保存，忌反复冻融，建议分装成小瓶（离心管）于-20℃冻存或置4℃保存备用。 注意事项： 1.是否需要4℃放置过夜，取决于胰酶的纯度。过去的胰酶纯度不高，所以难以溶解，需要4℃过夜。 而现在的胰酶纯度都很高，就没有必要4℃过夜。从理论上来说，4℃放置过夜，给细菌生长的机会，尽管过滤可以除去细菌，但除不掉其代谢产物。 2. 如果胰酶不溶、有絮状物，考虑可能的原因有：胰酶过期或是已经部分变性；溶液pH值不对；在没过滤之前的絮状沉淀是正常现象，因胰酶多取自动物胰腺，沉淀为组织块，过滤后即可。 3. Ca2+、Mg2+、血清和蛋白质对胰酶的活性有一定的抑制作用，所以需用不含Ca2+、Mg2+、这些离子的BSS如D-Hanks或者PBS来配制。正是这个道理，开始消化前，需用PBS将培养液冲洗干净后方加入胰酶进行消化，否则会大大影响胰酶的作用效果。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。 4.对于一些贴壁特别牢固的细胞，可在上述配方中，加入0.02%的EDTA，将胰酶与EDTA（乙二胺四乙酸）混合来进行消化。EDTA可通过结合（螯合）细胞间质中的二价阳离子从而破坏细胞连接从而增加消化效力。但因EDTA不能被血清中和，终止消化后，需用培养液或PBS彻底冲洗培养瓶（板），使得更好的再次利用培养瓶（板），否则再培养时可能会导致细胞容易脱壁。 EDTA在常温下难溶于酸，微溶于水（20℃时溶解度只有0．02g），但在碱性溶液中溶解性较大。因此为了更快的溶解EDTA可采取调节PH或者是加热的办法 。但须注意：由于胰酶不耐高温，因此待EDTA溶解后，温度有所下降才能加入胰酶。
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